细胞与分子免疫学杂志

摄涕止鼽方通过调控肠道微生物群及Th17/Treg平衡减轻变应性鼻炎大鼠炎症反应

目的 揭示摄涕止鼽方通过调控肠道微生物群进一步影响辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)及相关细胞因子而缓解变应性鼻炎(AR)的免疫调节机制。方法 28只雌性SD大鼠随机分为空白对照组(Control组)、 AR模型组(Model组)、中药组(STZQ组)、益生菌组(Probiotics组)。除Control组外其余各组以卵清蛋白(OVA)致敏制作AR模型。造模成功后Control组及Model组以生理盐水灌胃，STZQ组以摄涕止鼽方灌胃，Probiotics组以益生菌灌胃。2周后采集大鼠鼻黏膜、血清、外周血、结肠内容物。通过HE染色观察鼻黏膜组织炎症反应；16SrDNA测序检测并分析结肠内容物中细菌的结构及含量；流式细胞术检测外周血Treg及Th17细胞的相对比例；ELISA检测血清中Th17细胞及Treg相关细胞因子水平。结果 与Control组比较，Model组黏膜组织炎症反应，血清白细胞介素17A(IL-17A)、 IL-17E升高，IL-10下降，外周血Th17细胞百分比升高，Treg百分比下降，肠道有益菌减少，致病菌增多；与Model组比较，STZQ组血清IL-17A、 IL-17E下降，IL-10升高，外周血Th17细胞百分比下降，Treg百分比升高，肠道有益菌增多，致病菌减少。并且部分菌群结构变化与血清IL-17A、 IL-17E、 IL-10具有相关性。结论 摄涕止鼽方可重塑肠道菌群结构，影响外周血Th17/Treg平衡及相关细胞因子的表达，并且菌群结构变化与血清IL-17A、 IL-17E、 IL-10具有相关性。摄涕止鼽方通过调控肠道微生物群及Th17/Treg平衡减轻AR大鼠炎症反应。

不同培养时间对人单核细胞来源树突状细胞表型及其外泌体免疫膜蛋白的影响

目的 探讨培养时间对人单核细胞来源树突状细胞(DC)及其外泌体(DEX)免疫膜蛋白的影响。方法 采用重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导人单核细胞分化成DC,并经肿瘤坏死因子α(TNF-α)促使其成熟；超速离心法分离DEX,透射电子显微镜及Amnis量化成像流式细胞术鉴定DEX并检测DC及DEX的免疫膜蛋白表达情况。结果 体外培养至第10天，DC表面即高表达CD11c、 CD80、 CD86、主要组织相容性复合体Ⅰ(MHC-Ⅰ)及MHC-Ⅱ分子，至第18天达峰值，表达率分别为CD11c(78.66±20.33)%、 CD80 (76.41±10.02)%、 CD86 (96.43±0.43)%、 MHC-Ⅰ(84.71±2.96)%、 MHC-Ⅱ(80.01±7.03)%,第24天后表达总体呈下降趋势(除CD80和MHC-Ⅱ外，差异均具有统计学意义);培养至第30天，仍有80%的DC表达CD80、 CD86、 MHC-Ⅱ分子。DEX表面免疫膜蛋白表达亦于第18天最高，随后随培养时间延长总体下降(除CD80外，差异均具有统计学意义)。相关性分析显示，DC与DEX表面的免疫膜蛋白表达水平呈显著正相关(CD11c:r=0.98;CD80:r=0.65;CD86:r=0.82;MHC-Ⅰ:r=0.86;MHC-Ⅱ:r=0.93)。结论 人单核细胞来源的DC在体外培养中可高效表达免疫膜蛋白，并在一定时间内保持稳定；其分泌的DEX表面同样高表达免疫膜蛋白，且二者表达变化趋势基本一致。

小檗碱激活ACE2-Ang(1-7)-Mas信号通路抑制巨噬细胞泡沫化

目的 研究小檗碱(Ber)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞泡沫化的影响，及其作用机制与血管紧张素转换酶2(ACE2)-血管紧张素(Ang)(1-7)-Mas轴的相关性。方法 随机分为空白组、模型组(60μg/mL ox-LDL诱导RAW264.7细胞)、 Ber加药组(2.5、 5、 10μmol/L Ber处理模型),油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况合并酶法定量分析细胞内脂滴含量，酶法检测泡沫细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量，相关试剂盒检测氧化应激因子丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)及炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)水平，实时定量PCR检测ACE2、 Mas mRNA表达，Western blot法检测ACE2、 Mas蛋白表达，ELISA检测AngⅡ、 Ang(1-7)的含量。结果 与模型组比较，Ber加药组中泡沫化巨噬细胞内脂滴蓄积减少，且细胞内脂滴含量呈剂量依赖性减少；泡沫细胞内TC、 FC水平显著降低，胆固醇酯/总胆固醇(CE/TC)比值明显下降；氧化因子MDA含量明显减少，抗氧化因子SOD、 GSH含量明显升高，炎症因子TNF-α、 NO水平显著降低；ACE2-Ang(1-7)-Mas信号通路表达明显激活，且Ber高浓度组作用较低浓度组作用更显著，呈剂量依赖性。结论 Ber可能通过上调ACE2-Ang(1-7)-Mas信号通路对泡沫化巨噬细胞产生抑制作用，从而改善动脉粥样硬化(AS)。

基于P2X7R/NLRP3通路探究壮药双路通脑方对缺血性中风模型大鼠神经炎症的影响

目的 基于嘌呤能2X7受体(P2X7R)/核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3(NLRP3)通路探究壮药双路通脑方对缺血性中风(IS)大鼠神经炎症的影响。方法 大鼠分为IS组、对照组、双路通脑方组、 P2X7R抑制剂酸性亮蓝G(BBG)组、双路通脑方联合P2X7R激活剂三磷酸腺苷(ATP)组，每组18只。除对照组外，其他组大鼠均通过线栓法构建IS模型。建模成功后给药，给药1次/d,持续2周。检测大鼠神经功能评分及脑梗死体积占比；检测缺血半暗带脑组织病理；免疫荧光染色检测缺血半暗带脑组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和离子化钙结合适配分子1(Iba1)共表达阳性小胶质细胞数占比、精氨酸酶1(Arg1)和Iba1共表达阳性小胶质细胞数占比；ELISA检测缺血半暗带脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、 IL-10水平；Western blot法检测缺血半暗带脑组织中P2X7R、 NLRP3、 IL-1β蛋白表达。结果与对照组比较，IS组缺血半暗带脑组织神经元排列紊乱，核皱缩，且有大量炎性细胞浸润，神经功能评分、脑梗死体积占比、缺血半暗带脑组织中iNOS和Iba1共表达阳性小胶质细胞数占比、 TNF-α、 IL-6水平以及P2X7R、 NLRP3、 IL-1β蛋白表达升高，缺血半暗带脑组织中Arg1和Iba1共表达阳性小胶质细胞数占比、 TGF-β、 IL-10水平降低；与IS组比较，双路通脑方组、 BBG组缺血半暗带脑组织损伤有所缓解，神经功能评分、脑梗死体积占比、缺血半暗带脑组织中iNOS和Iba1共表达阳性小胶质细胞数占比、 TNF-α、 IL-6水平及P2X7R、 NLRP3、 IL-1β蛋白表达降低，缺血半暗带脑组织中Arg1和Iba1共表达阳性小胶质细胞数占比、 TGF-β、 IL-10水平升高；ATP逆转了壮药双路通脑方对IS大鼠小胶质细胞极化及神经炎症的影响。结论 壮药双路通脑方可能通过抑制P2X7R/NLRP3通路促进小胶质细胞由M1型向M2型转化，进而改善IS大鼠神经炎症。

基于RhoA/ROCK通路探讨黄芩苷对妊娠期糖尿病大鼠血脂代谢及免疫功能的影响

目的 探讨黄芩苷对妊娠期糖尿病(GDM)大鼠血脂代谢及免疫功能的影响与机制。方法 将给予高脂高糖饲料喂养的雌性大鼠和喂食普通饲料的雄性大鼠同笼制备孕鼠，并采用腹腔注射链脲佐菌素(35 mg/kg)构建GDM大鼠模型。将GDM大鼠随机分为模型组、法舒地尔(FA)(RhoA/ROCK抑制剂)组(10 mg/kg)、黄芩苷低(100 mg/kg)剂量组、黄芩苷高(200 mg/kg)剂量组、高剂量黄芩苷联合LPA(RhoA/ROCK激活剂)组(200 mg/kg黄芩苷+1 mg/kgLPA),每组12只；另取12只同批高糖高脂饲养的妊娠期大鼠为对照组。各组大鼠给予相应药物干预2周后，血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平；ELISA检测血清空腹胰岛素(FINS)水平，计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);试剂盒检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平以及外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和IL-10水平；HE染色观察肝组织病理学变化；流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群比例；实时定量PCR、 Western blot法检测肝组织Ras同源物家族成员A(RhoA)、 Rho相关卷曲蛋白激酶1(ROCK1)、 ROCK2的mRNA和蛋白表达。结果 与对照组相比，模型组FBG、 FINS和HOMA-IR、血清ALT、 AST、 TG、 TC、 LDL-C水平、外周血TNF-α、 IL-6水平、 CD8~+T细胞百分比、肝组织RhoA、 ROCK1、 ROCK2的mRNA和蛋白表达升高，血清HDL-C水平、外周血IL-10水平、 CD3~+T细胞、 CD4~+T细胞百分比和CD4~+T细胞/CD8~+T细胞比值降低；与模型组相比，FA组、黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组FBG、 FINS和HOMA-IR、血清ALT、 AST、 TG、 TC、 LDL-C水平、外周血TNF-α、 IL-6水平、 CD8~+T细胞百分比、肝组织RhoA、 ROCK1、 ROCK2的mRNA和蛋白表达降低，血清HDL-C、外周血IL-10水平、 CD3~+T细胞、 CD4~+T细胞和CD4~+T细胞/CD8~+T细胞比值升高；LPA可明显减弱黄芩苷对GDM大鼠血脂代谢和免疫功能的改善作用。结论 黄芩苷可能通过抑制RhoA/ROCK通路，改善GDM大鼠血脂代谢和免疫功能。

基于单细胞转录组数据解析肢端黑色素瘤肿瘤相关成纤维细胞的异质性特征

目的 探究肢端黑色素瘤（AM）中肿瘤相关成纤维细胞（CAF）的异质性特征及其在肿瘤微环境（TME）中的功能作用，为开发有效的治疗策略提供理论基础。方法 本研究使用的单细胞RNA测序数据由我们课题组前期生成并已上传至国家基因组科学数据中心（NGDC）的HRA001804数据集。从该数据集中选取5例AM患者的样本数据进行分析，包括4例原发灶样本（PL1、PL2、PL4、PL5）和 1例淋巴结转移样本（LG2）。采用无监督聚类、拟时间轨迹分析、转录因子调控网络分析和细胞间通信分析等生物信息学方法进行数据挖掘。结果 从41960个高质量细胞中识别出三种CAF亚型：免疫调节型(iCAF)、肌纤维型(mCAF)和增殖型(pCAF)。拟时间轨迹分析显示mCAF位于分化起始端，iCAF和pCAF分布于不同终末分支。FOS样抗原1（FOSL1）被鉴定为调控CAF向pCAF分化的关键转录因子，其共表达模块富集于p53信号通路、激活蛋白1（AP-1）转录因子网络和MYC原癌基因（MYC）介导的细胞增殖通路等。细胞通信分析推断了以iCAF为枢纽的相互作用网络，关键通路包括硫酸软骨素蛋白多糖4-(整合素α2+整合素β1)[CSPG4-(ITGA2+ITGB1)]信号通路、生长分化因子15-转化生长因子βⅡ型受体 (GDF15-TGFBR2)信号通路、半乳糖凝集素9(LGALS9)-CD45/CD44信号通路和CD70-CD27信号通路。结论 AM中CAF具有高度异质性，FOSL1在CAF分化中起关键调控作用，CAF通过复杂的细胞间通信网络参与TME调控。这些发现为理解AM生物学特性和开发靶向治疗策略提供了重要依据。

新教学内容体系下“抗原的加工处理和提呈”授课思考

本文基于《医学免疫学》第8版教材的知识体系重构，聚焦“抗原的加工处理和提呈”章节，重点阐述在新教学内容体系下，我们如何通过三方面举措理解并提升医学免疫学“第五章 抗原的加工处理和提呈”的教学实践。教学实践表明：将“抗原加工处理和提呈”放在“抗原”内容之后讲解，帮助学员明确抗原提呈细胞（APC）的生物学功能和定位；将APC置于人类白细胞抗原（HLA）之前讲解，以细胞实体为基础促进学员对HLA抽象概念的理解；将抗原的加工处理和提呈机制安排在T淋巴细胞之前讲授，为学员理解T细胞依赖主要组织相容性复合体（MHC）的抗原识别机制奠定基础，同时明晰与B淋巴细胞识别抗原的区别。该内容编排强化了知识衔接与逻辑贯通，有助于学生在理解掌握“抗原的加工处理和提呈”章节重难点内容的基础上，更系统、深入地理解《医学免疫学》的整体内容和脉络，并为后续T/B细胞免疫应答教学提供有力的支撑。

代谢相关脂肪性肝病中单核-巨噬细胞的作用机制及靶向治疗研究进展

代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）是一种与代谢功能障碍密切相关的慢性肝病已成为我国最常见的肝脏疾病之一。其发病机制复杂，涉及代谢功能紊乱及慢性炎症的共同作用。单核-巨噬细胞系统作为先天免疫的核心组成，在MAFLD的发生与发展中扮演着双重角色：一方面参与维持肝脏免疫稳态，另一方面在特定阶段驱动炎症反应并促进肝纤维化进程。本文系统综述了MAFLD进展中肝脏巨噬细胞群体的组成动态、表型转化及其分子调控机制；重点探讨了该系统在疾病不同阶段所呈现的复杂功能演变，并对靶向该系统的潜在治疗策略及其临床研究进展进行总结，以期为深入理解MAFLD的免疫代谢机制和和开发新型治疗干预方案提供理论参考。

cGAS-STING通路与狼疮相关性及治疗的研究进展

系统性红斑狼疮（SLE）是慢性自身免疫性疾病，其特征是炎症和免疫介导的多器官系统损伤。研究发现环鸟嘌呤-腺嘌呤核苷酸合成酶（cGAS）-干扰素基因刺激蛋白(STING)通路与SLE发病密切相关。cGAS-STING通路是一种先天免疫系统的模式识别通路。cGAS感测到胞质内双链DNA或内源性DNA后，产生2′3′环GMP-AMP（cGAMP）进行胞内信号转导，通过STING激化下游干扰素等免疫因子生成，进而引起感染应答、细胞应激和组织损伤。生理条件下，cGAS-STING通路对机体表现出保护作用。然而，持续刺激等因素可能导致通路紊乱，引起自身免疫性疾病。近年来学者从基因、线粒体膜、外切酶、脂多糖等方面对该通路进行干预，使其产生不同程度的抑制，为SLE治疗提供新思路。本文将cGAS-STING通路分为dsDNA感知、胞内信号转导两个阶段来综合论述近年基于cGAS-STING信号轴抑制SLE相关炎症因子生成的研究进展，并总结现有的通路相关治疗手段，为更有效的治疗SLE提供思路。

PD-L1⁺中性粒细胞在泛发性脓疱型银屑病中的作用和临床意义

目的 阐明泛发性脓疱型银屑病（GPP）中高表达程序性死亡配体1（PD-L1）的中性粒细胞的分布特征、功能表型及其与疾病严重程度和治疗应答的关联。方法 整合生物信息学与临床样本数据，比较GPP与健康对照（HC）、寻常型银屑病（PV）外周血及皮损中中性粒细胞PD-L1表达差异；经磁珠分选获得PD-L1?中性粒细胞，体外培养并以流式细胞术评估24h凋亡水平；采用流式细胞术与免疫荧光定量PD-L1?中性粒细胞比例，并分析其与临床指标[泛发性脓疱型银屑病皮损面积及严重程度指数（GPPASI）、高敏C反应蛋白（hsCRP）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）、复发次数）]及佩索利单抗治疗应答的相关性。结果 PD-L1在GPP外周血与皮损中性粒细胞中显著上调，较HC与PV差异明显。PD-L1?中性粒细胞呈凋亡延迟状态，并伴随白细胞介素36γ（IL-36γ）剪切相关酶释放增加，倾向促炎表型。PD-L1表达水平与疾病严重程度包括GPPASI、hsCRP及NLR呈显著正相关，皮损中PD-L1?CD15?中性粒细胞比例与复发次数亦呈正相关。基线PD-L1水平较高者对佩索利单抗的临床应答更佳。结论 PD-L1?中性粒细胞在GPP中富集，表现为凋亡延迟与促炎活化，并与疾病活动度、系统性炎症及生物制剂应答密切相关，提示其可能参与GPP免疫异质性的形成。该亚群有望作为评估疾病活动与指导个体化治疗的潜在免疫标志物。

溃疡性结肠炎发病机制中免疫因素的研究进展

溃疡性结肠炎是一种常见的慢性肠道疾病,近年来发病呈上升趋势,而其发病机制目前尚不明确。目前认为与多种因素有关。环境因素作用于遗传易感者,在肠道菌丛的参与下,启动肠道免疫和非免疫系统,发生免疫反应和炎症,从而出现临床症状。其中免疫异常被认为是溃疡性结肠炎发病的重要因素,主要包括自身抗体、细胞免疫、细胞因子、环氧合酶与基质金属蛋白酶、氧自由基和一氧化氮等。本文综述了溃疡性结肠炎免疫发病机制中的各种影响因素。

IL-6介导免疫炎性反应作用及其与疾病关系的研究进展

白细胞介素6(IL-6)在免疫系统中具有多效性和多功能性。IL-6主要由巨噬细胞产生,通过去除传染性病原体、诱导受损组织愈合、急性期免疫反应以及凝血级联反应从而执行保护功能。IL-6的表达调控严格遵循转录机制,但转录后机制失调后,持续产生的IL-6在自身免疫性疾病和慢性炎症中有重要作用。近年来,用人源化的抗IL-6受体抗体阻断IL-6能对疾病的治疗产生明显疗效,相关的分子靶向制剂也正在研究中。

当归多糖对细胞免疫功能的增进作用

目的:观察当归多糖(AP)对细胞免疫功能的影响。方法:用机械分散法制备小鼠单个脾细胞悬液,用MTT比色法检测脾细胞和T细胞的增殖。以免疫磁珠法从小鼠脾细胞中分离纯化T细胞后,用流式细胞术观察AP对CD4+T细胞比率的影响。结果:当归总多糖AP-0及其3个组分AP-1、AP-2和AP-3在30~100mg/L剂量的范围内,能显著促进脾细胞的增殖(P<0.01);其中组分AP-3能显著促进混合淋巴细胞和T细胞的增殖反应,显著增加培养的脾细胞中CD4+T细胞亚群的比率。结论:AP对细胞免疫功能具有增强作用,T细胞是当归多糖的靶细胞之一。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

IL-10的双向免疫调节作用

传统观点认为,同一细胞因子的免疫生物学作用相对固定,间接和直接途径刺激免疫应答或抑制免疫应答,两者选其一,但新近有文献报道同一个细胞因子在不同微环境中可发挥截然不同的免疫生物学作用。此领域中,近来以细胞因子IL-10的双向免疫调节活性最受关注,多年来有关IL-10的负向调节作用及其应用研究不断取得进展,另一方面,其免疫刺激的作用及免疫生物学意义的研究也正逐渐深入,并由此猜测其可能是一种多能细胞因子。本文将结合最新文献,就IL-10正、负向调节的免疫学特性进行综述。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

PD-1/PD-L1参与肿瘤免疫逃逸的研究进展

程序性死亡分子1及其配体(PD-1/PD-L1)是一对负性免疫共刺激分子,正常情况下,组织细胞表面的PD-L1与淋巴细胞表面的PD-1结合后,可抑制淋巴细胞功能,诱导活化的淋巴细胞凋亡,从而在自身免疫耐受及防止自身免疫性疾病中发挥重要作用。多种肿瘤细胞表面也表达PD-L1,肿瘤细胞表达的PD-L1,可与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD-1分子结合,抑制淋巴细胞的功能及细胞因子的释放,并诱导淋巴细胞凋亡,从而抵抗淋巴细胞的杀伤作用,最终导致肿瘤发生免疫逃逸。

红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。

小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立

目的建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法。方法获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用流式细胞术、实时定量PCR和ELISA的实验检测极化后细胞内以及细胞培养上清中的标志性细胞因子如IL-12、IL-10、Arg1、Ym1、MMR等的表达情况。结果形态学观察发现骨髓获取的细胞经诱导分化后呈现巨噬细胞特征性的贴壁形态;流式细胞术行胞内染色表明,极化后的M1型与M2型巨噬细胞各自表达其特征性的细胞因子IL-12和Arg1;实时定量PCR和ELISA分别检测所培养细胞胞内以及培养上清中的细胞因子,结果表明所刺激的M1型巨噬细胞高表达IL-12、iNOS、TNF-α等炎性因子,而M2型巨噬细胞表达MMR、Arg1、Ym1等标志因子。结论建立了稳定的M1和M2型巨噬细胞体外培养体系。

类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展