细胞与分子免疫学杂志

小檗碱通过靶向Lyn抑制BCR通路诱导慢性淋巴细胞白血病B细胞凋亡的机制研究

目的 探讨小檗碱(BBR)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中的作用，明确其是否通过直接靶向并抑制Src家族激酶Lck/Yes新型酪氨酸激酶(Lyn),进而诱导白血病细胞凋亡发挥抗肿瘤作用。方法 采用分子对接技术预测BBR与Lyn激酶的结合潜力；通过生物素下拉(Pull-down)实验验证二者的直接相互作用。体外实验使用人慢性B细胞白血病细胞系(MEC-1),通过CCK-8、 TUNEL染色检测细胞活力与凋亡；通过Western blot法检测B细胞受体(BCR)通路关键蛋白Lyn、脾酪氨酸激酶(Syk)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)及凋亡指标B细胞淋巴瘤2基因(Bcl2)相关X蛋白(BAX)、 Bcl2相关细胞死亡激动剂(BAD)、切割型半胱天冬酶3(c-caspase-3)、 Bcl2表达；利用实时定量PCR检测下游基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、 Bcl2、骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(c-Myc)转录水平。通过构建Lyn慢病毒过表达稳转株进行功能挽救实验。体内通过尾静脉注射构建C-NKG小鼠白血病模型，采用HE染色评估脾、肝、肺的肿瘤浸润，通过生存分析评估BBR疗效。结果 体外实验显示，BBR浓度依赖性地抑制MEC-1细胞增殖并诱导凋亡，同时抑制BCR通路蛋白磷酸化及下游基因表达。分子对接与Pull-down实验证实BBR可直接结合Lyn。Lyn过表达可逆转BBR诱导的细胞凋亡及对通路的抑制。体内实验表明，BBR治疗能显著减轻白血病小鼠的器官浸润并延长其生存期，此效应可被Lyn过表达抵消。结论 BBR通过直接靶向Lyn激酶，抑制BCR-Lyn-PI3K-AKT信号通路，从而在体内外诱导CLL细胞凋亡、抑制肿瘤进展。本研究为将BBR作为靶向Lyn的天然药物治疗CLL提供了实验依据。

华蟾素通过抑制CD244⁺巨噬细胞恢复T细胞的活性和结直肠癌化疗敏感性

目的 探讨华蟾素(Cino)对结直肠癌(CRC)肿瘤微环境(TME)以及奥沙利铂(OX)化疗敏感性的影响。方法 挖掘TCGA-COAD队列中CD244的临床表达差异，通过单细胞测序数据的UMAP降维分析明确CD244的细胞定位，同时分析其与免疫细胞的互相作用特征。体内实验建立CRC荷瘤小鼠模型，随机分为4组：Tu组、 Cino组、 OX组和Cino联合OX组，隔日腹腔注射给药处理，分析肿瘤体积、荧光信号/质量变化和组织形态学变化，利用实时定量PCR、 Western blot法和免疫荧光染色等实验技术检测肿瘤增殖、转移情况、 CD244⁺巨噬细胞的表达分布和T细胞活性。体外实验以白细胞介素4(IL-4)刺激RAW264.7细胞构建M2型巨噬细胞模型，观察Cino、 OX或Cino联合OX处理对CD244⁺巨噬细胞表达的影响，并以相应处理的巨噬细胞条件培养基(CM)培养T细胞，检测T细胞耗竭和激活标志物的表达，T细胞杀伤实验检测其杀伤功能。结果 体内实验显示，Cino处理对小鼠肿瘤生长、增殖和转移无明显影响，OX处理和Cino联合OX处理抑制肿瘤的增殖和转移，且Cino联合OX处理抑制作用增强。Cino和OX均抑制肿瘤组织中CD244⁺巨噬细胞的表达，Cino与OX联合有协同抑制作用，Cino、 OX单独处理对T细胞活性无明显影响，二者联合可抑制T细胞耗竭，提高CD8~+T细胞浸润。体外实验表明，Cino、 OX处理抑制CD244⁺巨噬细胞的表达，二者联合抑制作用增强；IL-4处理后取上清培养T细胞，T细胞的肿瘤杀伤能力降低，Cino或OX处理的CM可提高T细胞杀伤能力，二者联合显示出更强的杀伤能力。结论 Cino通过靶向抑制CD244⁺巨噬细胞，增强T细胞肿瘤杀伤能力，重塑TME,增强CRC对OX的化疗敏感性。

体外诱导多能干细胞定向分化为巨噬细胞的方法

目的 构建一套操作简便、成本可控的诱导多能干细胞(iPSC)定向分化为巨噬细胞(Mφ)的方案。方法 采用仙台病毒载体将重编程因子导入人脐带血单个核细胞诱导获得iPSC,通过拟胚体途径，并配合骨形态发生蛋白4(BMP4)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及白细胞介素3(IL-3)等关键细胞因子将iPSC诱导分化为Mφ。通过流式细胞术、实时荧光定量PCR等方法鉴定Mφ表型、功能及免疫原性相关分子的表达。结果 本方案无需动物滋养层细胞共培养、低氧条件或中间阶段的细胞分选，即可成功获得高纯度的CD14~+CD11b~+Mφ,且具有正常的吞噬功能与极化能力。免疫表型分析显示，免疫检查点CD276在iPSC分化为Mφ后细胞阳性率下调，这与β细胞或视网膜上皮细胞分化后CD276表达稳定的情形并不一致。结论 本研究通过无滋养层/低氧/分选的体系成功分化出高纯度Mφ,并首次观察到Mφ分化中CD276谱系依赖性下调现象。

大鼠主动脉血管周围脂肪间充质干细胞的提取扩增及鉴定

目的 建立大鼠主动脉血管周围脂肪间充质干细胞(PV-ADSC)的提取扩增方法，为血管重塑及相关心血管疾病研究提供可靠的细胞模型。方法 无菌分离1月龄Sprague Dawley(SD)大鼠主动脉血管周围脂肪组织(PVAT),经漂洗、剪碎、消化、过筛后接种培养；待细胞汇合率达80%～90%时进行传代扩增，培养期间持续观察细胞形态及其增殖情况；取P5代细胞，采用流式细胞术分析表面标志物CD分子表达水平，定向诱导分化实验及相应染色检测成脂/成骨/成软骨三系分化潜能。结果原代培养第4天，可见梭形、星形或多角形细胞自接种组织边缘迁出；5～6 d出现岛屿样细胞克隆团；7～8 d细胞集落融合，呈漩涡或平行排列，单层贴壁生长。传代后细胞形态渐趋一致，为典型成纤维样梭形，增殖旺盛，至P8代仍未见明显细胞衰老或异常分化现象。P5代细胞高表达间充质干细胞(MSC)表面标志物CD90(93.60±0.62)%、 CD73(86.80±2.40)%、 CD44(97.77±0.58)%、 CD29(98.60±0.30)%,平均阳性率达(94.19±5.00)%;低表达造血干细胞(HSC)表面标志物CD45(5.42±0.78)%、 CD34(7.15±0.49)%、 CD11b/c(3.74±0.08)%,平均阳性率仅(5.44±1.55)%,显著低于前者。诱导分化实验显示，细胞可成功分化为脂肪细胞(油红O染色阳性)、成骨细胞(茜素红染色阳性)及软骨细胞(阿利新蓝染色阳性)。结论 本研究方法能够成功提取扩增出符合MSC形态学特征及表面标志物表达特点、具备良好自我更新能力和成脂/成骨/成软骨三系分化潜能的大鼠主动脉PV-ADSC,可为血管重塑及相关心血管病研究提供可靠的细胞模型。

基于单细胞测序探索伴有引流淋巴结肺腺癌患者的免疫景观

目的 通过单细胞测序技术(SCT)探讨伴有引流淋巴结(DLN)肺腺癌(LUAD)患者的免疫景观。方法 从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的基因表达综合数据库(GEO)获取肺癌单细胞数据集(数据编号GSE277742),该数据集包括18名经病理证实存在淋巴结转移的患者和4名没有转移证据的对照患者的胸腔内DLN。使用R语言进行数据质量控制、降维聚类和细胞亚群注释及细胞通信分析，识别关键细胞亚群并筛选差异表达基因；并利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库进行Kaplan-Meier生存分析。结果 单细胞测序分析显示，伴有DLN的患者中CD8~+T细胞比例较高，其中细胞周期蛋白依赖激酶6(CDK6)、细胞周期蛋白D3(CCND3)、 CCNH、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2A/B/D(CDKN2A/B/D)、视网膜母细胞瘤蛋白1(RB1)呈显著高表达；TCGA数据库分析表明，BIOCARTA＿CELLCYCLE＿PATHWAY通路的相关基因在患者与正常样本中表达差异显著，且与生存期相关。结论 通过生物信息学方法筛选出多个在LUAD患者DLN中差异表达的关键基因，为深入解析伴有DLN的LUAD免疫微环境的调控机制提供了新视角。

异栓翅芹醇通过线粒体自噬缓解哮喘气道炎症的作用机制

目的 探讨异栓翅芹醇（ISO）通过调节线粒体自噬缓解屋尘螨（HDM）诱导的哮喘气道炎症的作用机制。方法 体内实验：创建HDM诱导的BAIB/c小鼠哮喘模型，给予ISO低、高剂量或地塞米松（DEX）干预。检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞及因子水平，血清免疫球蛋白E（IgE）水平，观察肺组织病理变化，检测肺组织线粒体自噬及炎症相关蛋白表达。体外实验：培养BEAS-2B细胞，利用生物信息学分析筛选ISO核心靶点。使用ISO及孕烷X受体（PXR）激动剂（PCN）干预后，检测线粒体ROS（mtROS）、氧化应激指标、线粒体膜电位、线粒体形态及PTEN诱导激酶1/帕金蛋白（PINK1/Parkin）通路蛋白表达。结果ISO干预可明显缓解HDM诱导的哮喘小鼠气道炎症反应，降低BALF中嗜酸性粒细胞比例及白细胞介素4（IL-4）、IL-5、IL-13等炎症因子水平，减少血清总IgE含量，并减轻肺组织病理损伤。机制上，ISO能够上调肺组织中PXR和MFN1的表达，同时下调动力蛋白相关蛋白1（DRP1）、线粒体分裂蛋白1（FIS1）、PINK1及Parkin的表达水平。结合生物信息学分析与LASSO回归筛选结果，提示PXR可能是ISO发挥保护作用的关键靶点。在BEAS-2B细胞中，ISO处理可减轻HDM诱导的mtROS产生、氧化应激和线粒体膜电位下降，改善线粒体形态，而PCN可模拟ISO的效应。结论 ISO可能通过直接靶向PXR，抑制PINK1/Parkin介导的过度线粒体自噬，改善线粒体功能，从而缓解HDM诱导的哮喘气道炎症。

miR-128-3p靶向STEAP4/VDAC1抑制铁死亡改善哮喘气道炎症机制研究

目的 探讨miR-128-3p通过前列腺六跨膜上皮抗原4（STEAP4）/电压依赖性阴离子通道1（VDAC1）轴在支气管哮喘气道炎症及气道上皮细胞铁死亡（Ferroptosis）中的相关分子机制。方法 体内建立卵清蛋白（OVA）诱导的小鼠哮喘模型，体外采用白细胞介素13（IL-13）刺激人支气管上皮细胞（BEAS-2B）建立炎症模型。通过miRNA芯片筛选出差异表达的miRNA，并通过实时荧光定量PCR进行验证。通过miR-128-3pagomir对基因进行干预处理；采用生化试剂盒检测各生化指标；采用肺组织化学染色评估气道炎症；并结合Westernblot法和免疫共沉淀技术检测铁死亡、线粒体分裂及蛋白相互作用；用线粒体分裂抑制剂（Mdivi-1）、铁螯合剂（DFO）及VDAC1抑制剂（VBIT-12）进行机制验证。结果 在BEAS-2B细胞IL-13组和哮喘小鼠OVA组中miR-128-3p表达显著下调，且靶向负调控STEAP4表达；体内给予miR-128-3pagomir能够显著抑制STEAP4并减轻小鼠气道炎症；敲低STEAP4可逆转BEAS-2B细胞IL-13组活力下降、铁超载及氧化应激；过表达STEAP4会促进线粒体活性氧（mtROS）蓄积和磷酸化动力相关蛋白1（p-DRP1）介导的线粒体分裂，加剧细胞铁死亡；STEAP4与VDAC1直接相互作用，而抑制VDAC1能逆转STEAP4介导的线粒体损伤与铁死亡。结论 miR-128-3p通过调控STEAP4/VDAC1信号轴抑制线粒体相关铁死亡，从而改善哮喘气道炎症，可能成为哮喘治疗的潜在分子靶点。

BACH1调控Nrf2/HO-1轴在糖尿病肾病铁死亡和氧化应激的作用

目的 探讨BTB域和CNC同系物1（BACH1）在糖尿病肾病（DN）发生发展中的作用及其通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1（Nrf2/HO-1）信号通路影响铁死亡的分子机制。方法 8周龄db/db小鼠随机分为模型组、BACH1-shRNA敲低组及阴性对照组，并以db/m小鼠作为正常对照。通过肾脏原位注射慢病毒敲低肾组织BACH1表达，检测小鼠肾功能指标血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿微量白蛋白/肌酐比值（UACR）；通过苏木精-伊红（HE）、过碘酸-雪夫（PAS）和Masson染色观察肾脏病理变化；试剂盒检测氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（GSH/GSSG）、活性氧（ROS）及铁死亡相关指标亚铁离子含量、脂质过氧化物（LPO）；利用Westernblot法和实时荧光定量PCR技术检测BACH1、核Nrf2、HO-1、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）的表达。结果 与db/m组相比，db/db组小鼠肾组织中BACH1的mRNA和蛋白表达均显著上调，并伴随Scr、BUN和UACR显著升高，肾脏出现明显的病理学改变；同时SOD活性显著降低，MDA含量显著升高，GSH/GSSG比值显著下降，ROS水平显著升高；组织亚铁离子含量和LPO水平显著升高，GPX4和SLC7A11表达显著下调，Nrf2核转位水平下降。而敲低BACH1后，db/db小鼠Scr、BUN和UACR均显著降低，肾脏病理损伤明显减轻；同时SOD活性升高，MDA含量降低，GSH/GSSG比值回升，ROS水平降低；铁死亡进程受到抑制，组织铁含量和LPO水平显著降低，GPX4和SLC7A11表达显著上调。同时，敲低BACH1显著促进了Nrf2核转位，并上调了其下游靶蛋白HO-1的表达。结论BACH1在DN中高表达，其可能通过抑制Nrf2/HO-1通路，加剧氧化应激与铁死亡，从而促进DN的进展。敲低BACH1可激活Nrf2/HO-1通路，发挥肾脏保护作用，为DN治疗提供了新的靶点。

MIF调控HIF-1α介导的有氧糖酵解在肺纤维化中的作用机制研究

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）调控缺氧诱导因子1α（HIF-1α）介导的有氧糖酵解在肺纤维化（PF）病理过程中的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠分为对照组、模型组（BLM）、BLM联合阴性对照慢病毒（BLM联合sh-NC）组及BLM联合MIF-shRNA慢病毒（BLM联合sh-MIF）组，经气管给药28d后，收集肺组织、支气管肺泡灌洗液（BALF）和血清样本。通过HE染色与Masson染色评估肺组织病理损伤与纤维化程度；采用乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒评估糖酵解能力；采用乳酸检测试剂盒测定糖酵解终产物含量；通过Westernblot法检测HIF-1α、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2，6-二磷酸酶3（PFKFB3）、丙酮酸激酶M2型（PKM2）表达。将原代小鼠肺成纤维细胞分为Control组、重组MIF蛋白（rMIF）组、rMIF联合PHD活化剂Octyl-α-ketoglutarate（rMIF联合PHD-Act）组、MIF抑制剂（ISO-1）组、PHD抑制剂MK-8617（PHD-IN）组以及Control组、PHD-IN组、rMIF组及rMIF和ISO-1联合PHD-IN组。通过实时荧光定量PCR及Westernblot法检测HIF-1α表达、PHD水平;通过基于荧光法的代谢试剂盒，检测细胞的氧消耗速率（OCR）和细胞外酸化速率（ECAR）。结果 与Control组相比，BLM组小鼠肺组织纤维化严重，LDH活性、乳酸含量及PFKFB3、PKM2蛋白表达均显著升高；干扰MIF表达可显著逆转上述变化并减轻纤维化。细胞实验结果显示：rMIF处理可显著上调HIF-1α并下调PHD1、PHD2表达，该作用可被PHD活化剂Octyl-α-ketoglutarate逆转；抑制MIF可降低HIF-1α表达水平，而抑制PHD则直接诱导HIF-1α高表达。rMIF或PHD-IN处理均能显著提升细胞的OCR与ECAR。结论 MIF可通过抑制PHD稳定HIF-1α，从而驱动肺成纤维细胞发生有氧糖酵解代谢重编程，促进肺纤维化发展。

血液透析合并结核感染患者的临床特征及淋巴细胞亚群分析

目的探讨血液透析尿毒症患者合并结核感染的临床特征及外周血淋巴细胞亚群的变化。方法采用回顾性研究方法，收集2015-01-01/2022-12-31我院收治的600例血液透析尿毒症患者临床资料。将完成结核感染T细胞斑点试验和/或结核菌素纯蛋白衍生物试验的患者，分为血液透析合并活动性结核组(活动性结核组，55例)、血液透析合并结核潜伏感染组(潜伏感染组，26例)、血液透析未合并结核感染组(未感染组，采用单纯随机抽样方法抽取50例)，并选取同期健康体检者作为对照组(50例)。比较四组临床特征、实验室检查及淋巴细胞亚群结果。结果活动性结核组以中老年男性为主；临床症状以发热(67.27%)、咳嗽咳痰(61.82%)、乏力纳差(52.73%)为主，感染部位以肺部(70.91%)多见。与未感染组相比，潜伏感染组与活动性结核组白蛋白、活动性结核组血红蛋白明显下降；潜伏感染组与活动性结核组中血沉、C反应蛋白水平显著升高；潜伏感染组CD3⁺T细胞计数、自然杀伤(NK)细胞计数与比例、CD4⁺/CD8⁺比值降低，CD8⁺T细胞比例升高；活动性结核组中总淋巴细胞、CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD19⁺B细胞及NK细胞计数与CD4⁺/CD8⁺比值下降，CD3⁺T细胞比例与CD8⁺T细胞比例均升高，以上差异均具有统计学意义。结论。外周淋巴细胞亚群血细胞计数与比例在血液透析合并活动性结核、潜伏结核感染及无结核感染患者中存在明显组间差异，可用于不同结核感染状态的鉴别及病情评估。

溃疡性结肠炎发病机制中免疫因素的研究进展

溃疡性结肠炎是一种常见的慢性肠道疾病,近年来发病呈上升趋势,而其发病机制目前尚不明确。目前认为与多种因素有关。环境因素作用于遗传易感者,在肠道菌丛的参与下,启动肠道免疫和非免疫系统,发生免疫反应和炎症,从而出现临床症状。其中免疫异常被认为是溃疡性结肠炎发病的重要因素,主要包括自身抗体、细胞免疫、细胞因子、环氧合酶与基质金属蛋白酶、氧自由基和一氧化氮等。本文综述了溃疡性结肠炎免疫发病机制中的各种影响因素。

IL-6介导免疫炎性反应作用及其与疾病关系的研究进展

白细胞介素6(IL-6)在免疫系统中具有多效性和多功能性。IL-6主要由巨噬细胞产生,通过去除传染性病原体、诱导受损组织愈合、急性期免疫反应以及凝血级联反应从而执行保护功能。IL-6的表达调控严格遵循转录机制,但转录后机制失调后,持续产生的IL-6在自身免疫性疾病和慢性炎症中有重要作用。近年来,用人源化的抗IL-6受体抗体阻断IL-6能对疾病的治疗产生明显疗效,相关的分子靶向制剂也正在研究中。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

当归多糖对细胞免疫功能的增进作用

目的:观察当归多糖(AP)对细胞免疫功能的影响。方法:用机械分散法制备小鼠单个脾细胞悬液,用MTT比色法检测脾细胞和T细胞的增殖。以免疫磁珠法从小鼠脾细胞中分离纯化T细胞后,用流式细胞术观察AP对CD4+T细胞比率的影响。结果:当归总多糖AP-0及其3个组分AP-1、AP-2和AP-3在30~100mg/L剂量的范围内,能显著促进脾细胞的增殖(P<0.01);其中组分AP-3能显著促进混合淋巴细胞和T细胞的增殖反应,显著增加培养的脾细胞中CD4+T细胞亚群的比率。结论:AP对细胞免疫功能具有增强作用,T细胞是当归多糖的靶细胞之一。

IL-10的双向免疫调节作用

传统观点认为,同一细胞因子的免疫生物学作用相对固定,间接和直接途径刺激免疫应答或抑制免疫应答,两者选其一,但新近有文献报道同一个细胞因子在不同微环境中可发挥截然不同的免疫生物学作用。此领域中,近来以细胞因子IL-10的双向免疫调节活性最受关注,多年来有关IL-10的负向调节作用及其应用研究不断取得进展,另一方面,其免疫刺激的作用及免疫生物学意义的研究也正逐渐深入,并由此猜测其可能是一种多能细胞因子。本文将结合最新文献,就IL-10正、负向调节的免疫学特性进行综述。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

PD-1/PD-L1参与肿瘤免疫逃逸的研究进展

程序性死亡分子1及其配体(PD-1/PD-L1)是一对负性免疫共刺激分子,正常情况下,组织细胞表面的PD-L1与淋巴细胞表面的PD-1结合后,可抑制淋巴细胞功能,诱导活化的淋巴细胞凋亡,从而在自身免疫耐受及防止自身免疫性疾病中发挥重要作用。多种肿瘤细胞表面也表达PD-L1,肿瘤细胞表达的PD-L1,可与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD-1分子结合,抑制淋巴细胞的功能及细胞因子的释放,并诱导淋巴细胞凋亡,从而抵抗淋巴细胞的杀伤作用,最终导致肿瘤发生免疫逃逸。

小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立

目的建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法。方法获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用流式细胞术、实时定量PCR和ELISA的实验检测极化后细胞内以及细胞培养上清中的标志性细胞因子如IL-12、IL-10、Arg1、Ym1、MMR等的表达情况。结果形态学观察发现骨髓获取的细胞经诱导分化后呈现巨噬细胞特征性的贴壁形态;流式细胞术行胞内染色表明,极化后的M1型与M2型巨噬细胞各自表达其特征性的细胞因子IL-12和Arg1;实时定量PCR和ELISA分别检测所培养细胞胞内以及培养上清中的细胞因子,结果表明所刺激的M1型巨噬细胞高表达IL-12、iNOS、TNF-α等炎性因子,而M2型巨噬细胞表达MMR、Arg1、Ym1等标志因子。结论建立了稳定的M1和M2型巨噬细胞体外培养体系。

类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展

红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。