细胞与分子免疫学杂志

LncRNA EFRL在同型半胱氨酸致动脉粥样硬化巨噬细胞胞葬中的作用及机制研究

目的 探究胞葬作用相关长链非编码RNA(EFRL)在同型半胱氨酸(Hcy)致动脉粥样硬化(AS)巨噬细胞胞葬作用中的影响及其作用机制。方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞，设立对照组(0μmol/L Hcy)和Hcy干预组(100μmol/L Hcy), Hcy干预的巨噬细胞转染锁核苷酸(GapmeR)后设置EFRL敲低阴性对照组(Hcy联合LNA-NC)和EFRL敲低组(Hcy联合LNA-EFRL);高通量测序获得差异性表达LncRNA MSTRG.88917.16(EFRL),基因组浏览器(UCSC)分析保守性，转录本蛋白编码潜能预测工具(CPC)和转录本蛋白编码能力预测软件(CPAT)分析编码蛋白能力，基因本体数据库(GO)和基因组破译方面的数据库(KEGG)分析相关生物学功能；核质分离法和RNA-FISH检测EFRL在巨噬细胞中定位；实时定量PCR检测Hcy干预的巨噬细胞中EFRL及靶基因遗传性痉挛性截瘫4型基因(SPAST)的表达水平；流式细胞术检测紫外线诱导的Jurkat细胞凋亡率；免疫荧光技术结合体外巨噬细胞胞葬实验分析巨噬细胞胞葬作用；ELISA检测炎症相关因子白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-18含量。结果 鉴定新的LncRNA MSTRG.88917.16并命名为EFRL(Efferocytosis Relatived LncRNA,胞葬作用相关长链非编码RNA); UCSC、 CPC、 CPAT明确EFRL保守性高且不具备编码蛋白能力，GO、 KEGG功能富集分析显示EFRL可能参与巨噬细胞胞葬作用；核质分离法和RNA-FISH检测EFRL定位于巨噬细胞细胞核；与对照组相比，Hcy组中EFRL及靶基因SPAST表达水平增高；与对照组(0 min)相比较，实验组(15、 30 min)凋亡率Annexin V>85%;与Hcy联合LNA-NC组相比，Hcy联合LNA-EFRL组中巨噬细胞胞葬作用增强，介导的炎症因子含量降低；与Hcy联合LNA-NC组相比，Hcy联合LNA-EFRL组中SPAST表达水平降低。结论降低EFRL的表达能够缓解Hcy抑制巨噬细胞胞葬作用的过程，其机制与EFRL调控下游靶基因SPAST有关。

基于FTO调控Notch1通路观察阳和平喘颗粒对哮喘BMSC归巢的影响

目的 观察N⁶基腺嘌呤(m~6A)甲基化调控缺刻基因1(Notch1)通路对哮喘骨髓间充质干细胞(BMSC)归巢的影响，以及中药复方阳和平喘颗粒干预研究。方法 采用大鼠BMSC和支气管上皮细胞共培养的方式。将提取的细胞分为支气管上皮细胞组、哮喘支气管上皮细胞联合间充质干细胞共培养组(以下简称共培养组)、共培养细胞联合正常血清组、共培养细胞联合最佳含药血清组、 siRNA-FTO联合正常血清组、 siRNA-FTO-NC联合正常血清组、 siRNA-FTO联合最佳含药血清组。检测共培养细胞活力和细胞周期变化；免疫荧光染色法检测BMSC归巢水平和归巢标志物；实时定量PCR检测Notch1通路相关基因的表达；Western blot法检测Notch1通路相关蛋白的表达。结果 与支气管上皮细胞组比较，共培养细胞组BMSC归巢水平和趋化因子受体4(CXCR4)、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)、Notch1、重组信号结合蛋白J(RBP-J)、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白表达升高。与共培养细胞组、共培养细胞联合正常血清组比较，共培养细胞联合最佳含药血清组BMSC归巢水平及CXCR4、 SDF-1表达升高，Notch1、 Hes1蛋白mRNA表达降低。与siRNA-FTO-NC联合正常血清组比较，siRNA-FTO联合正常血清组Notch1、 Activated Notch1、 RBP-J、 Hes1蛋白表达和细胞活力升高，BMSC归巢水平降低。与siRNA-FTO联合正常血清组比较，siRNA-FTO联合最佳含药血清组Notch1、 RBP-J mRNA, Activated Notch1、 Hes1蛋白表达降低，BMSC归巢水平升高，共培养细胞联合最佳含药血清组Notch1、 RBP-J、 Hes1 mRNA表达降低。与siRNA-FTO联合最佳含药血清组比较，共培养细胞联合最佳含药血清组细胞活力及Notch1、 Activated Notch1、 RBP-J、 Hes1蛋白降低，BMSC归巢水平升高。结论 阳和平喘颗粒可能通过上调FTO表达，抑制下游Notch1信号通路表达，从而促进哮喘BMSC归巢，减轻哮喘炎症。

龙胆苦苷通过调节肝星状细胞中MIF-SPP1信号通路预防巨噬细胞介导的肝纤维化机制研究

目的 探究龙胆苦苷(GPS)通过调节肝星状细胞中巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)-分泌型磷蛋白1(SPP1)信号通路预防巨噬细胞介导的肝纤维化机制。方法 将LX-2细胞分为对照组、转化生长因子β(TGF-β)组、 TGF-β联合GPS(25、 50、 100、 150)μmol/mL组，EDU检测细胞增殖、 Transwell^TM检测细胞侵袭、 Western blot法检测平滑肌激动蛋白(α-SMA)与一型胶原蛋白(COL1A1)蛋白表达。分离M1型巨噬细胞条件培养基(M1-CM)用于处理TGF-β组、 TGF-β联合GPS组LX-2细胞，同时检测细胞上清液中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)浓度，细胞增殖与侵袭能力，以及α-SMA与COL1A1蛋白表达。生物信息学分析GPS、肝纤维化与巨噬细胞相关基因的靶点交集，药物亲和反应的靶点稳定性(DARTS)实验和Western blot法验证GPS对MIF的调控作用。进一步将LX-2细胞分为对照组、 TGF-β组、 TGF-β联合M2-CM组、 TGF-β和oe-NC联合M2-CM组、 TGF-β和oe-MIF联合M2-CM组，分析细胞上清液iNOS、 Arg1浓度及细胞增殖、侵袭、 α-SMA与COL1A1蛋白表达变化。将LX-2细胞分为对照组、 TGF-β组、 TGF-β联合oe-NC组、 TGF-β联合oe-MIF组、 TGF-β和oe-MIF联合GPS组，Western blot法测定MIF与SPP1蛋白表达。构建大鼠肝纤维化模型，探究GPS对体内肝纤维化的潜在治疗作用。结果 与对照组相比，TGF-β组LX-2细胞增殖与侵袭能力增加，α-SMA与COL1A1蛋白表达增强，而GPS干预能够抑制TGF-β条件LX-2细胞增殖与侵袭，并降低α-SMA与COL1A1蛋白表达。与对照组相比，TGF-β组细胞上清液中iNOS浓度上调、 Arg1浓度下降，并且M1-CM处理在TGF-β干预的基础上，进一步增加了iNOS浓度、降低了Arg1浓度，同时促进了细胞增殖与侵袭，上调了α-SMA与COL1A1蛋白表达，而GPS能够逆转M1-CM干预的结果。生物信息学分析发现MIF为GPS、肝纤维化与巨噬细胞相关基因的靶点交集之一，且GPS能够靶向并抑制其表达。相比于TGF-β组，M2-CM干预后细胞上清液中iNOS浓度下降、 Arg1浓度增加，LX-2细胞增殖与侵袭能力降低，α-SMA与COL1A1蛋白表达减弱，然而过表达MIF后，逆转了M2-CM的干预效果。Western blot结果显示，相比于对照组，TGF-β组MIF与SPP1蛋白表达增强，过表达MIF后MIF与SPP1蛋白表达进一步增强，而GPS干预则抑制了MIF与SPP1蛋白表达。动物实验中，GPS干预治疗能够减轻肝纤维化大鼠肝损伤，并抑制肝组织中MIF与SPP1、 α-SMA与COL1A1蛋白表达。结论 GPS可能通过抑制肝星状细胞中MIF-SPP1信号通路预防巨噬细胞介导的肝纤维化。

泛素特异性肽酶21增加FOXM1稳定性促进子宫内膜异位症巨噬细胞M2极化的机制研究

目的 探究泛素特异性肽酶21(USP21)增加叉头框蛋白M1(FOXM1)稳定性促进子宫内膜异位症(EM)巨噬细胞M2极化的机制研究。方法 收集子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜基质细胞(EESC)和常规健康评估者正常子宫内膜基质细胞(NESC)进行体外培养，实时定量PCR及Western blot法检测细胞中USP21和FOXM1表达水平。将EESC与巨噬细胞共培养，实时定量PCR检测M1极化标志物白细胞介素6(IL-6)、 CXC趋化因子配体10(CXCL10)和M2极化标志物CD206、纤连蛋白1(FN1),流式细胞术检测M2标志物CD206, ELISA检测细胞上清液IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10、转化生长因子β(TGF-β)水平，免疫共沉淀检测USP21与FOXM1相互作用及FOXM1泛素化水平，放线菌酮(CHX)实验检测FOXM1蛋白稳定性。结果 与NESC组相比，EESC组细胞中USP21和FOXM1表达水平显著升高；与NESC联合M0组相比，EESC联合M0组细胞中M1极化标志物(IL-6、 CXCL10)表达无显著差异，M2极化标志物(CD206、 FN1)表达升高，M2巨噬细胞数量显著增多，细胞上清液IL-6和TNF-α水平无显著差异，IL-10和TGF-β水平升高，以上表明去泛素化酶USP21在EM中高表达，促进巨噬细胞M2极化。敲低USP21或FOXM1均能抑制EM巨噬细胞M2极化。EESC中USP21与FOXM1存在相互作用，FOXM1泛素化水平下降，FOXM1蛋白稳定性增强。过表达FOXM1逆转敲低USP21对EM巨噬细胞M2极化的抑制作用。结论 去泛素化酶USP21与FOXM1相互作用，增加FOXM1稳定性，促进EM巨噬细胞M2极化。

GBP2通过诱导巨噬细胞极化及上皮细胞转化促进硅肺进展的机制研究

目的 本研究旨在探究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)在硅肺纤维化过程中的表达情况、表型变化及作用机制。方法 通过免疫组织化学染色和免疫荧光检测硅肺组织中GBP2的表达和定位。构建体外细胞模型，运用Western blot、实时定量PCR等方法探究二氧化硅(CS)刺激后GBP2在不同细胞系中的功能。通过Western blot法明确GBP2在不同细胞系中的作用机制。结果 GBP2在硅肺患者的肺组织中高表达，免疫组织化学染色和免疫荧光染色发现GBP2定位于巨噬细胞和上皮细胞中。体外细胞实验表明CS刺激THP-1细胞通过GBP2激活c-Jun通路，促进炎症因子分泌并促使巨噬细胞M2型极化的发生，在上皮细胞中GBP2通过上调Krüppel样转录因子8(KLF8),促进上皮-间充质转化(EMT)的发生。结论 GBP2不但在巨噬细胞中激活c-Jun促进炎症因子产生以及发生巨噬细胞M2型极化，而且在上皮细胞中激活转录因子KLF8发生EMT,共同促进硅肺的进展。

新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对前列腺癌细胞生长的影响

目的 明确SHSFSVGSGDHSFT序列修饰的前列腺特异性膜抗原(PSMA)靶向性多肽对去势抵抗性前列腺癌C4-2细胞生长的影响。方法 设计及合成包含SHSFSVGSGDHSFT序列的新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽及内皮抑素24肽，内皮抑素24肽用作对照。光谱共聚焦显微镜检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽的靶向性；CCK-8法检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞增殖的影响；流式细胞术确定新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞凋亡的影响；采用划痕实验及Transwell^TM小室检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞运动及迁移的影响；Westernblot法检测新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对PSMA表达的影响。结果 新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽能特异性靶向PSMA高表达的前列腺癌C4-2细胞并抑制PSMA表达，进而有效的抑制其增殖、迁移，以及诱导C4-2细胞凋亡。结论 新型内皮抑素/PSMA靶向性多肽对C4-2细胞具有生长抑制作用，这一研究结果为去势抵抗性前列腺癌的治疗提供新思路。

中性粒细胞与淋巴细胞比值在慢性阻塞性肺疾病合并肺癌中的相关研究进展

中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR) 作为一种简便、可靠的炎症生物标志物，在多种炎症性疾病和肿瘤中的临床应用备受关注。该指标通过量化中性粒细胞和淋巴细胞数量，反映了机体的免疫炎症状态。本文主要对NLR在慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并晚期肺癌(LC）中的研究进展进行综述，旨在为临床实践提供新的诊断工具和预后评估方法及治疗参考。

II 型免疫应答在肿瘤治疗中的研究进展

当前的癌症免疫疗法主要侧重于引发I型免疫应答来对抗癌症，但在实体瘤中的疗效仍有待提高。II型免疫应答是一类主要由 2型辅助T(Th2)细胞介导的免疫途径，通过分泌细胞因子等来调节机体对感染、过敏及组织修复的免疫反应。然而，近年来的研究发现，II型免疫应答在肿瘤微环境中的作用复杂多样，既可以通过帮助肿瘤细胞逃避免疫监视和肿瘤相关炎症而促进肿瘤生长，也可以通过抗肿瘤免疫机制抑制肿瘤生长。一方面，白细胞介素4(IL-4)通过激活信号转导和转录激活因子6(STAT6)信号通路诱导M2型巨噬细胞极化，协同程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD-1/PD-L1)轴加剧免疫抑制；另一方面，Th2相关因子在特定治疗情境下可重塑抗肿瘤免疫，这主要是由激活细胞毒性T淋巴细胞所引起的。最近研究表明，协同免疫检查点阻断(ICB)疗法不仅可以通过刺激滤泡辅助性T(Tfh)细胞中IL-4的产生来增强肿瘤引流淋巴结中的CD8⁺T细胞的活化和增殖，而且也能驱动CD4?T细胞产生IL-5，经嗜酸性粒细胞IL-33级联反应促进瘤内CD8?T细胞浸润及活化。这种“促瘤-抑瘤”双重特性揭示了Ⅱ型免疫应答在肿瘤免疫动态平衡中的枢纽地位。本文将系统综述II 型免疫应答在肿瘤免疫中的双重角色及其在癌症免疫治疗中的潜在作用。

HLA-A*02与HLA-E共同提呈CD8⁺T细胞抗原表位在感染性疾病中的研究进展

人类白细胞抗原(HLA)在免疫应答中发挥着关键作用。其中，HLA-A*02作为经典HLA-Ia类分子，通过提呈内源性抗原表位激活CD8⁺T细胞，从而在抗病毒免疫应答中发挥重要作用；而非经典HLA-Ib类分子HLA-E可通过与自然杀伤(NK)细胞表面CD94/NKG2结合，参与免疫稳态的调控。近年来研究发现，HLA-E同样能够提呈病原体及肿瘤等来源的抗原表位激活CD8⁺T细胞，并且其提呈的肽段序列与HLA-A*02提呈肽段高度相似，提示HLA-A*02与HLA-E可能通过协同或竞争机制，共同参与CD8⁺T细胞抗感染免疫应答。本文系统综述了HLA-A*02与HLA-E的结构特征及抗原提呈机制的异同，及其在感染性疾病中共同提呈病原体抗原表位的现象，深入探讨二者共同提呈抗原表位在宿主防御与免疫稳态维持中的可能作用。基于HLA-A*02与HLA-E共同提呈抗原表位来设计新型多肽疫苗，有望克服人群HLA多样性的局限，为建立更持久、更广泛的免疫保护提供理论依据和新的方向。

TFEB核转位介导的GPX4溶酶体降解促进子痫前期滋养层细胞铁死亡的机制研究

目的 探讨转录因子EB(TFEB)核转位介导的谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)溶酶体降解在人胚胎滋养层细胞HTR8-S/Vneo铁死亡中的作用。方法 将HTR8-S/Vneo细胞分为正常组、缺氧组、缺氧联合si-NC组(细胞转染si-NC)、缺氧联合si-TFEB组(细胞转染si-TFEB)、缺氧和si-TFEB联合RSL3组(细胞转染si-TFEB并用铁死亡诱导剂RSL3处理)和缺氧和si-TFEB联合PP242组(细胞转染si-TFEB并用溶酶体激活剂PP242处理)。采用CCK-8试剂盒、划痕实验、Transwell^TM实验分别检测细胞活力、侵袭数量和迁移率。使用FerroOrange铁离子探针检测细胞中Fe²⁺的含量。利用DCFH-DA活性氧(ROS)荧光探针检测ROS水平。ELISA检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。Western blot检测法TFEB、磷酸化TFEB(p-TFEB)、GPX4蛋白表达以及TFEB核转位情况。利用溶酶体绿色荧光探针检测细胞溶酶体荧光强度。结果 与正常组相比，缺氧组细胞活力、侵袭数量和迁移率显著减少，细胞中Fe²⁺水平、ROS 荧光强度、LDH和MDA水平显著增加，SOD活性和GSH水平显著减低，TFEB、p-TFEB蛋白表达显著增加，GPX4蛋白表达显著减少，TFEB发生核转位，溶酶体荧光强度增加。与缺氧联合si-NC组相比，缺氧联合si-TFEB组细胞活力、侵袭数量和迁移率显著增加，铁死亡水平降低，TFEB核转位被抑制，溶酶体荧光强度降低。与缺氧联合si-TFEB组相比，缺氧和si-TFEB联合RSL3组HTR8-S/Vneo细胞铁死亡各项指标被逆转。与缺氧联合si-TFEB组相比，缺氧和si-TFEB联合PP242组细胞铁死亡水平升高。结论 抑制TFEB核转位降低人胚胎滋养层细胞HTR8-S/Vneo的铁死亡过程，其机制可能为抑制GPX4的溶酶体降解。

溃疡性结肠炎发病机制中免疫因素的研究进展

溃疡性结肠炎是一种常见的慢性肠道疾病,近年来发病呈上升趋势,而其发病机制目前尚不明确。目前认为与多种因素有关。环境因素作用于遗传易感者,在肠道菌丛的参与下,启动肠道免疫和非免疫系统,发生免疫反应和炎症,从而出现临床症状。其中免疫异常被认为是溃疡性结肠炎发病的重要因素,主要包括自身抗体、细胞免疫、细胞因子、环氧合酶与基质金属蛋白酶、氧自由基和一氧化氮等。本文综述了溃疡性结肠炎免疫发病机制中的各种影响因素。

IL-6介导免疫炎性反应作用及其与疾病关系的研究进展

白细胞介素6(IL-6)在免疫系统中具有多效性和多功能性。IL-6主要由巨噬细胞产生,通过去除传染性病原体、诱导受损组织愈合、急性期免疫反应以及凝血级联反应从而执行保护功能。IL-6的表达调控严格遵循转录机制,但转录后机制失调后,持续产生的IL-6在自身免疫性疾病和慢性炎症中有重要作用。近年来,用人源化的抗IL-6受体抗体阻断IL-6能对疾病的治疗产生明显疗效,相关的分子靶向制剂也正在研究中。

当归多糖对细胞免疫功能的增进作用

目的:观察当归多糖(AP)对细胞免疫功能的影响。方法:用机械分散法制备小鼠单个脾细胞悬液,用MTT比色法检测脾细胞和T细胞的增殖。以免疫磁珠法从小鼠脾细胞中分离纯化T细胞后,用流式细胞术观察AP对CD4+T细胞比率的影响。结果:当归总多糖AP-0及其3个组分AP-1、AP-2和AP-3在30~100mg/L剂量的范围内,能显著促进脾细胞的增殖(P<0.01);其中组分AP-3能显著促进混合淋巴细胞和T细胞的增殖反应,显著增加培养的脾细胞中CD4+T细胞亚群的比率。结论:AP对细胞免疫功能具有增强作用,T细胞是当归多糖的靶细胞之一。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

IL-10的双向免疫调节作用

传统观点认为,同一细胞因子的免疫生物学作用相对固定,间接和直接途径刺激免疫应答或抑制免疫应答,两者选其一,但新近有文献报道同一个细胞因子在不同微环境中可发挥截然不同的免疫生物学作用。此领域中,近来以细胞因子IL-10的双向免疫调节活性最受关注,多年来有关IL-10的负向调节作用及其应用研究不断取得进展,另一方面,其免疫刺激的作用及免疫生物学意义的研究也正逐渐深入,并由此猜测其可能是一种多能细胞因子。本文将结合最新文献,就IL-10正、负向调节的免疫学特性进行综述。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

PD-1/PD-L1参与肿瘤免疫逃逸的研究进展

程序性死亡分子1及其配体(PD-1/PD-L1)是一对负性免疫共刺激分子,正常情况下,组织细胞表面的PD-L1与淋巴细胞表面的PD-1结合后,可抑制淋巴细胞功能,诱导活化的淋巴细胞凋亡,从而在自身免疫耐受及防止自身免疫性疾病中发挥重要作用。多种肿瘤细胞表面也表达PD-L1,肿瘤细胞表达的PD-L1,可与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD-1分子结合,抑制淋巴细胞的功能及细胞因子的释放,并诱导淋巴细胞凋亡,从而抵抗淋巴细胞的杀伤作用,最终导致肿瘤发生免疫逃逸。

红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。

小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立

目的建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法。方法获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用流式细胞术、实时定量PCR和ELISA的实验检测极化后细胞内以及细胞培养上清中的标志性细胞因子如IL-12、IL-10、Arg1、Ym1、MMR等的表达情况。结果形态学观察发现骨髓获取的细胞经诱导分化后呈现巨噬细胞特征性的贴壁形态;流式细胞术行胞内染色表明,极化后的M1型与M2型巨噬细胞各自表达其特征性的细胞因子IL-12和Arg1;实时定量PCR和ELISA分别检测所培养细胞胞内以及培养上清中的细胞因子,结果表明所刺激的M1型巨噬细胞高表达IL-12、iNOS、TNF-α等炎性因子,而M2型巨噬细胞表达MMR、Arg1、Ym1等标志因子。结论建立了稳定的M1和M2型巨噬细胞体外培养体系。

类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展