细胞与分子免疫学杂志

Zfp335调控效应性Treg比例及肿瘤免疫应答

目的 锌指蛋白335(Zfp335)参与调控胸腺T细胞的早期发育和外周T细胞亚群的分化，本研究旨在探讨Zfp335调控调节性T细胞(Treg)在肿瘤免疫中的作用和机制。方法 用他莫昔芬在Treg中特异性敲除Zfp335基因[Zfp335^fl/fl叉头盒P3(FOXP3)^creERT2],并构建MC38移植瘤模型。接种肿瘤后第7天，观察并测量肿瘤的大小，第12天剥离肿瘤组织，用流式细胞术检测野生型(WT)组和Zfp335敲除(Zfp335^CKO)组小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中CD4⁺ T细胞、CD8⁺ T细胞和Treg的比例，以及效应性Treg(eTreg)的线粒体功能。结果 自接种肿瘤后第10天开始，Zfp335^CKO组肿瘤体积显著小于WT组。Zfp335^CKO组CD4⁺ T细胞和CD8⁺ T细胞的肿瘤浸润比例、及其对应的效应细胞比例显著高于WT组。Zfp335^CKO组CD4⁺ T细胞和CD8⁺ T细胞分泌细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的比例显著高于WT组，Zfp335^CKO组CD8⁺ T细胞分泌颗粒酶B (GzmB)的比例显著高于WT组。Zfp335^CKO组Treg、诱导性共刺激分子(ICOS)⁺ Treg比例显著低于WT组。Zfp335^CKO组eTreg表达Mitotracker Deep Red的水平显著低于WT组。结论 在肿瘤发生过程中，Treg特异性缺失Zfp335导致其活化减弱，与eTreg的线粒体功能降低有关；Zfp335^CKO小鼠肿瘤浸润的效应性T细胞增多、分泌杀伤性细胞因子增多，进而抵抗肿瘤发展。

成纤维细胞在急性炎症反应中的基因表达及调控机制研究

目的 探讨小鼠成纤维细胞(MEF)在炎症条件下的基因表达及其调控机制，为明确MEF细胞在炎症反应中的功能和发现通过调节MEF细胞功能发挥抗炎作用的药物奠定基础。方法 将体外培养的MEF细胞分为脂多糖(LPS)处理组、炎症条件培养基(CM)处理组和溶媒对照组，然后分别利用LPS、 CM和等体积溶媒处理MEF细胞；采用转录组测序分析两种刺激对MEF细胞基因表达谱的影响，实时荧光定量PCR验证CM诱导MEF细胞高表达基因的转录水平，ELISA分析细胞上清液中细胞因子浓度；最后通过Western blot法检测CM对MEF细胞内信号通路活化的调节作用。结果 转录组测序分析显示LPS和CM刺激均能诱导MEF细胞内大量基因的转录，CM相对LPS能够增加急性期蛋白、炎症因子、趋化因子、基质金属蛋白酶(MMP)、前列腺素合成酶及集落刺激因子的mRNA转录，并获得实时荧光定量PCR的验证。ELISA测定显示CM相对LPS显著增加MEF细胞分泌白细胞介素6(IL-6)、 CC趋化因子配体2(CCL2)和CXC趋化因子配体1(CXCL1)。机制研究显示LPS和CM均能诱导MEF细胞内核因子κB p65(NF-κB p65)、 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、 TANK结合激酶(TBK)的磷酸化，CM相对LPS能增加MEF细胞内信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)的磷酸化。结论 LPS和CM均能诱导MEF细胞内多种炎症相关基因的转录和蛋白分泌，CM能增强LPS诱导的MEF细胞活化，其机制可能与CM特异性增强STAT3信号通路活化有关。

新型全人源LAG-3单克隆抗体LBL-007联合PD-1抗体通过NF-κB信号通路抑制肿瘤细胞增殖和侵袭迁移

目的 探究新型全人源淋巴细胞激活基因3 (LAG-3)单克隆抗体LBL-007与程序性死亡蛋白1(PD-1)抗体对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法 将活化的人淋巴细胞系Jurkat细胞与肿瘤细胞系A549、 MGC803细胞共培养，并加入同型对照抗体人源IgG、 LBL-007、抗PD-1抗体BE0188以及核因子κB(NF-κB)信号通路激动剂肿瘤坏死因子α(TNF-α)进行干预。通过克隆形成实验检测各组肿瘤细胞增殖能力；Transwell^TM实验检测共培养后肿瘤细胞侵袭能力；划痕愈合实验检测肿瘤细胞迁移能力；Western blot法检测肿瘤细胞NF-κB信号通路相关蛋白κB抑制因子激酶α(IKKα)、磷酸化的IKKα(p-IKKα)、核因子κB亚基(p65)、磷酸化的核因子κB亚基(p-p65)、人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化的IκBα (p-IκBα)和基质金属蛋白酶9(MMP9)、MMP2表达水平。结果 与对照组和IgG同型对照组相比，LBL-007和BE0188显著降低共培养体系中肿瘤细胞增殖和侵袭迁移能力以及p-IKKα、 p-p65、 p-IKBα蛋白磷酸化水平和MMP9、 MMP2表达水平，联合使用能增强抑制效果。NF-κB信号通路激动剂TNF-α处理可逆转LBL-007和BE0188对肿瘤细胞NF-κB信号通路和细胞的增殖和侵袭迁移能力的抑制作用。结论 LBL-007和抗PD-1抗体通过阻断NF-κB信号通路联合抑制A549和MGC803肿瘤细胞侵袭迁移和增殖能力。

miR-582-5p调控DUSP1对结核分枝杆菌感染巨噬细胞的影响

目的 探讨miR-582-5p调控双特异性磷酸酶1 (DUSP1)对结核分枝杆菌(Mtb)感染巨噬细胞的影响。方法 将巨噬细胞THP-1细胞分为Control组、 Mtb组、 inhibitor-NC组、 miR-582-5p inhibitor组、 miR-582-5p inhibitor联合si-NC组、 miR-582-5p inhibitor联合si-DUSP1组；实时定量PCR检测细胞miR-582-5p、 DUSP1基因表达；ELISA试剂盒检测γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-1β水平；CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot法检测细胞中DUSP1、 B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、 Bcl2相关X蛋白(BAX)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白表达；验证miR-582-5p与DUSP1的靶向关系。结果 与Control组相比，Mtb组巨噬细胞miR-582-5p表达、 IFN-γ、 IL-6、 TNF-α、 IL-1β水平、细菌负荷量、 A₄₅₀值(24 h、 48 h)、 Bcl2蛋白表达升高，DUSP1 mRNA表达、凋亡率、 c-caspase-3、 BAX和DUSP1蛋白表达降低；与Mtb组和inhibitor-NC组相比，miR-582-5p inhibitor组上述指标被部分逆转；下调DUSP1表达可部分逆转下调miR-582-5p表达对Mtb感染巨噬细胞的抑制作用。结论 抑制miR-582-5p表达可上调DUSP1表达，进而抑制Mtb感染巨噬细胞增殖和炎性反应，促进细胞凋亡。

类风湿关节炎滑膜成纤维细胞分泌的HAPLN1促进巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨类风湿关节炎(RA)中滑膜成纤维细胞(FLS)分泌的透明质酸和蛋白聚糖连接蛋白1 (HAPLN1)对巨噬细胞(MΦ)极化的影响。方法 将人单核细胞白血病细胞(THP-1)诱导成MΦ,采用重组HAPLN1(rHAPLN1)干预MΦ。分别将HAPLN1基因过表达质粒(HAPLN1^OE)或沉默HAPLN1的小干扰RNA(si-HAPLN1)转染RA-FLS,构建RA-FLS与MΦ共培养细胞模型。使用CCK-8法检测MΦ活力，流式细胞术检测促炎M1型及抑炎M2型MΦ比例，实时定量PCR、 Western blot法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平。结果 与对照组相比，rHAPLN1组MΦ活力增加，rHAPLN1组和HAPLN1^OE组M1/MΦ比例、炎症因子水平均升高。在si-HAPLN1组M1/MΦ比例及炎症因子表达均下降，而挽救实验中加用rHAPLN1后同样促进MΦ向M1型极化。结论 RA-FLS分泌的HAPLN1可促进MΦ向M1型极化。

一种新型负载微囊泡抗肝癌DC疫苗的制备与鉴定

目的 本研究旨在明确肝癌细胞系Hepa1-6细胞分泌的微囊泡(MP)的特性和表征，研究Hepa-1-6细胞分泌的MP(Hepa1-6-MP)对树突状细胞(DC)的刺激作用和进入DC的途径，并探索Hepa1-6-MP刺激的DC所诱导的CD8⁺T细胞对肝癌细胞的特异性杀伤作用，试图开发一种新型的抗肝癌免疫治疗模式。方法 通过Westernblot实验、透射电子显微(TEM)和动态光散射(DLS)实验对所提取的Hepa1-6-MP进行检测与鉴定。流式细胞仪检测DC摄取MP抗原的途径与方式。ELISA检测负载Hepa1-6-MP的DC对CD8⁺T细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)释放水平的影响。乳酸脱氢酶(LDH)实验检测负载Hepa1-6-MP的DC所刺激的CD8⁺T对肝癌细胞的杀伤作用。结果Hepa1-6-MP经鉴定后其形态、大小和标志物符合要求。Hepa1-6-MP可增加DC成熟标志物CD80和CD86的表达，并以网格蛋白介导的内吞途径和吞噬途径被DC摄取，然后刺激CD8⁺T释放了高水平的TNF-α和IFN-γ，并诱导CD8⁺T特异性杀伤肝癌细胞。结论 提示负载MP的DC可能是未来一种很有前景的治疗肝癌的DC疫苗。

IL-23p19单克隆抗体通过调节Th17/Treg平衡缓解MRL/lpr狼疮小鼠肾炎

目的 利用MRL/lpr狼疮样小鼠模型，观察白细胞介素23p19亚基（IL-23p19）单克隆抗体的治疗作用。方法 选用8周的雌性MRL/lpr小鼠共36只，随机分为6组。分别是PBS组（空白对照）、IgG组（同型IgG）、地塞米松（DEX）组（阳性对照）、IL-23p19单克隆抗体共分为3个浓度梯度治疗组：LD（1 mg/kg低浓度）、MD（3 mg/kg中浓度）、HD（10 mg/kg高浓度）治疗组。从小鼠12周龄时开始药物干预，尾静脉注射给药。尿蛋白检测试纸检测小鼠尿蛋白含量；ELISA检测小鼠血清中抗dsDNA抗体的含量；全自动生化分析检测仪检测小鼠血清肌酐及尿素氮含量；HE染色法及PAS染色分析肾脏组织病理变化；免疫荧光分析肾脏组织内IgG及C3免疫复合物的沉积情况；流式细胞术检测小鼠脾脏Th1、Th2、Th17、Tfh细胞和调节性T细胞（Treg）亚群表达；实时定量PCR检测脾脏相关转录因子表达情况。结果IL-23p19单克隆抗体可以减少MRL/lpr小鼠的尿蛋白水平，减少脾脏的肿大，改善肾功能和降低抗dsDNA抗体水平；缓解MRL/lpr小鼠的肾小球肾炎，并降低肾脏免疫复合物沉积；IL-23p19单克隆抗体可显著抑制MRL/lpr小鼠脾脏Th1、Th17细胞比例，上调Treg比例；同时显著下调脾脏转录因子T-bet（T-bet）和视黄酸受体相关孤儿受体γt（RORγt）mRNA水平，上调叉头框P3（FOXP3）mRNA水平。结论IL-23p19单克隆抗体对MRL/lpr小鼠具有显著的治疗效果，可能通过调控Th17/Treg之间细胞的平衡来发挥作用。

整合多源转录组学数据鉴别哮喘发生上皮细胞的潜在生物标志物

目的 基于多源转录组学数据的生物信息学分析，挖掘哮喘上皮细胞的潜在生物标志物，并通过哮喘模型的肺组织及其上皮细胞验证潜在靶基因的表达。方法 整合基因表达数据集（GEO）数据库中3组哮喘患者和正常对照组上皮细胞的基因表达谱数据，通过基因差异表达分析和基因共表达网络分析，鉴别与哮喘相关的关键基因及生物学通路。最后，利用哮喘动物模型在肺组织和肺组织上皮细胞验证主要关键基因。结果 通过差异基因表达分析，哮喘上皮细胞与正常对照组相比，存在1121个上调基因和1484个下调基因。生物学通路富集分析表明，上调基因主要参与糖基化过程，下调基因主要参与免疫细胞分化过程。基因共表达网络分析发现，糖基化相关通路的模块9与哮喘呈显著正相关，而参与胰岛素等信号通路的模块17与哮喘呈显著负相关。我们发现多肽N-乙酰半乳糖胺转移酶5（GALNT5）、吡咯啉-5-羧酸还原酶-1（PYCR1）和癌胚抗原相关细胞黏附分子5（CEACAM5）基因是模块9的关键基因且在哮喘中显著上调。最后，我们在哮喘肺组织上皮细胞中验证了GALNT5、PYCR1和CEACAM5在模型组中表达均上调。同时，通过构建大鼠哮喘模型，我们进一步证实了这三个基因的蛋白水平在模型组肺组织中也显著上调。结论 本研究通过数据整合和实验验证，鉴定出与哮喘疾病发展密切相关的关键基因和生物学通路，这些结果为哮喘的诊断和治疗提供新的理论基础和潜在靶点。

多组学生物标志物在干燥综合征中的研究进展

干燥综合征（SS）是一种常见的自身免疫性疾病，主要累及外分泌腺体，表现为口干、眼干等症状，还会出现脏器损害。近年来，随着组学技术的不断发展，代谢组学、蛋白组学和转录组学在SS的研究中取得了显著进展。通过对代谢组学、蛋白组学和转录组学生物标志物在SS中的研究现状进行综述，发现糖代谢、中性粒细胞相关酶、线粒体能量代谢、铁死亡、细胞凋亡在SS中被研究较多，加深了对SS病因及干预效果异质性的理解；多项研究表明羟脯氨酸可以作为区分SS与IgG4标记物、特定的细胞因子和趋化因子可作为SS早期检测识别的特定生物标志物、rs11797表达与SS并发淋巴瘤高度相关，调控DNA甲基化的一些基因可为本病治疗提供新的靶点等，这些发现有助于对SS发生发展过程中个性化的防治方案制定。本文在总结现有进展的同时，也对SS组学研究领域的未来方向进行了展望。

ATPIF1通过调节糖酵解能力影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性研究

目的 探究ATP合酶抑制因子1（ATPIF1）对于嵌合抗原受体（CAR）-NK92细胞抗肿瘤活性的影响。方法 构建靶向Her2的ATPIF1过表达和敲低的CAR-NK92细胞；流式细胞术检查CAR阳性表达率；CCK-8法检测细胞增殖能力；Seahorse分析细胞糖酵解能力；线粒体膜电位探针（JC-1）法检测细胞线粒体膜电位水平；萤火虫荧光酶素报告基因检测法检测靶细胞裂解率；流式细胞术检测细胞CD107a、自然杀伤细胞组2成员D（NKG2D）、颗粒酶B（GzmB）、穿孔素(perforin)、白细胞介素2（IL-2）表达水平；实时荧光定量PCR检测细胞干扰素诱导蛋白与四肽重复1（IFIT1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、ATPIF1、己糖激酶1（HK1）表达；2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）抑制糖酵解，检测对CAR-NK92细胞抗肿瘤能力影响。结果 成功制备靶向Her2的对照组CAR-NK92细胞以及ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞；ATPIF1过表达的CAR-NK92细胞靶细胞裂解率、NKG2D和CD107a的表达水平、GzmB和IL-2分泌能力、IFIT1和TNF-α的mRNA表达水平显著上调，ATPIF1敲低表达后结果相反。ATPIF1过表达引起CAR-NK92细胞代谢重编程，线粒体膜电位(Δψm)显著降低，HK1的mRNA表达水平显著上调，基础糖酵解和糖酵解能力增强。2-DG（5μmol/L）抑制糖酵解后，ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞与对照组相比，NKG2D和CD107a表达水平无显著差异。结论ATPIF1通过调节糖酵解代谢能力来影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性，通过过表达ATPIF1可以增强CAR-NK92的抗肿瘤活性。

溃疡性结肠炎发病机制中免疫因素的研究进展

溃疡性结肠炎是一种常见的慢性肠道疾病,近年来发病呈上升趋势,而其发病机制目前尚不明确。目前认为与多种因素有关。环境因素作用于遗传易感者,在肠道菌丛的参与下,启动肠道免疫和非免疫系统,发生免疫反应和炎症,从而出现临床症状。其中免疫异常被认为是溃疡性结肠炎发病的重要因素,主要包括自身抗体、细胞免疫、细胞因子、环氧合酶与基质金属蛋白酶、氧自由基和一氧化氮等。本文综述了溃疡性结肠炎免疫发病机制中的各种影响因素。

IL-6介导免疫炎性反应作用及其与疾病关系的研究进展

白细胞介素6(IL-6)在免疫系统中具有多效性和多功能性。IL-6主要由巨噬细胞产生,通过去除传染性病原体、诱导受损组织愈合、急性期免疫反应以及凝血级联反应从而执行保护功能。IL-6的表达调控严格遵循转录机制,但转录后机制失调后,持续产生的IL-6在自身免疫性疾病和慢性炎症中有重要作用。近年来,用人源化的抗IL-6受体抗体阻断IL-6能对疾病的治疗产生明显疗效,相关的分子靶向制剂也正在研究中。

当归多糖对细胞免疫功能的增进作用

目的:观察当归多糖(AP)对细胞免疫功能的影响。方法:用机械分散法制备小鼠单个脾细胞悬液,用MTT比色法检测脾细胞和T细胞的增殖。以免疫磁珠法从小鼠脾细胞中分离纯化T细胞后,用流式细胞术观察AP对CD4+T细胞比率的影响。结果:当归总多糖AP-0及其3个组分AP-1、AP-2和AP-3在30¹00mg/L剂量的范围内,能显著促进脾细胞的增殖(P<0.01);其中组分AP-3能显著促进混合淋巴细胞和T细胞的增殖反应,显著增加培养的脾细胞中CD4+T细胞亚群的比率。结论:AP对细胞免疫功能具有增强作用,T细胞是当归多糖的靶细胞之一。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

IL-10的双向免疫调节作用

传统观点认为,同一细胞因子的免疫生物学作用相对固定,间接和直接途径刺激免疫应答或抑制免疫应答,两者选其一,但新近有文献报道同一个细胞因子在不同微环境中可发挥截然不同的免疫生物学作用。此领域中,近来以细胞因子IL-10的双向免疫调节活性最受关注,多年来有关IL-10的负向调节作用及其应用研究不断取得进展,另一方面,其免疫刺激的作用及免疫生物学意义的研究也正逐渐深入,并由此猜测其可能是一种多能细胞因子。本文将结合最新文献,就IL-10正、负向调节的免疫学特性进行综述。

Annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的比较

目的比较annexin V-FITC/PI双标记与Hoechst33342/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡的优缺点。方法用DEX诱导胸腺细胞凋亡和H2O2诱导K562细胞系细胞凋亡,应用Hoechst33342/PI和annexin V-FITC/PI双色标记流式细胞术检测体系检测细胞凋亡情况。结果 Annexin V-FITC/PI双标记法能准确地反映2种模型中的细胞凋亡情况,与其检测原理一致;而Hoechst33342/PI双标记法虽能准确反映DEX诱导胸腺细胞的凋亡情况,但在检测H2O2诱导的K562细胞凋亡时,其早期凋亡细胞的分布与其检测原理明显不符。结论与annexin-V-FITC/PI双标记法相比,Hoechst33342/PI双标记法有一定的局限性。

PD-1/PD-L1参与肿瘤免疫逃逸的研究进展

程序性死亡分子1及其配体(PD-1/PD-L1)是一对负性免疫共刺激分子,正常情况下,组织细胞表面的PD-L1与淋巴细胞表面的PD-1结合后,可抑制淋巴细胞功能,诱导活化的淋巴细胞凋亡,从而在自身免疫耐受及防止自身免疫性疾病中发挥重要作用。多种肿瘤细胞表面也表达PD-L1,肿瘤细胞表达的PD-L1,可与肿瘤浸润淋巴细胞表面的PD-1分子结合,抑制淋巴细胞的功能及细胞因子的释放,并诱导淋巴细胞凋亡,从而抵抗淋巴细胞的杀伤作用,最终导致肿瘤发生免疫逃逸。

红景天苷对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、ROS和NO产生的影响

目的:研究红景天苷(Sal)对小鼠腹腔巨噬细胞体外增殖、凋亡、吞噬、胞内活性氧簇(ROS)及分泌一氧化氮(NO)的影响,初步探讨其对小鼠腹腔巨噬细胞的免疫调节作用。方法:无菌分离小鼠腹腔巨噬细胞,并制备单细胞悬液,以不同终浓度(80μmol/L、160μmol/L及320μmol/L)的Sal和巨噬细胞共培养4 h,再以脂多糖(LPS)和γ-干扰素(IFN-γ)进行共刺激。利用MTT比色法检测Sal对巨噬细胞体外增殖的影响。用放线菌酮(CHX)诱导巨噬细胞凋亡,用Sytox G reen染色结合荧光酶标仪检测Sal对CHX诱导巨噬细胞凋亡的影响。用流式细胞术(FCM)检测Sal对巨噬细胞吞噬功能的影响。用2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)染色法结合荧光酶标仪检测Sal对胞内ROS产生的影响;用G riess反应检测Sal对巨噬细胞分泌NO的影响。结果:MTT比色法检测显示,终浓度为80、160、320μmol/L的Sal均可显著促进LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞增殖(P<0.05)。荧光酶标仪检测Syto xG reen染色法的结果显示,160μmol/L的Sal可抑制CHX诱导的巨噬细胞凋亡(P<0.01)。FCM结果显示,各浓度的Sal均能促进单纯药物组和实验药物组LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。用荧光酶标仪检测DH2DCFDA染色结果表明,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激的巨噬细胞胞内ROS的产生均具有显著的抑制作用(P<0.01)。Griess反应检测NO含量的结果显示,各浓度的Sal对LPS+IFN-γ刺激巨噬细胞产生NO均具有促进作用(P<0.05)。结论:Sal对LPS和IFN-γ刺激的巨噬细胞增殖具有显著的促进作用,对CHX诱导的巨噬细胞凋亡具有显著的抑制作用,对静息态和活化态的巨噬细胞的吞噬功能均有增强作用,并能减少LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞胞内ROS的产生;但能促进LPS和IFN-γ活化的巨噬细胞NO的分泌。

小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立

目的建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法。方法获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用流式细胞术、实时定量PCR和ELISA的实验检测极化后细胞内以及细胞培养上清中的标志性细胞因子如IL-12、IL-10、Arg1、Ym1、MMR等的表达情况。结果形态学观察发现骨髓获取的细胞经诱导分化后呈现巨噬细胞特征性的贴壁形态;流式细胞术行胞内染色表明,极化后的M1型与M2型巨噬细胞各自表达其特征性的细胞因子IL-12和Arg1;实时定量PCR和ELISA分别检测所培养细胞胞内以及培养上清中的细胞因子,结果表明所刺激的M1型巨噬细胞高表达IL-12、iNOS、TNF-α等炎性因子,而M2型巨噬细胞表达MMR、Arg1、Ym1等标志因子。结论建立了稳定的M1和M2型巨噬细胞体外培养体系。

类风湿关节炎发病机制及其治疗方法研究进展